เมื่อเซลล์ที่เราเพาะเลี้ยงเข้าไป

โรงงานเซลล์มีการปนเปื้อนซึ่งส่วนใหญ่จัดการได้ยากหากเซลล์ที่ปนเปื้อนมีคุณค่าและยากที่จะได้รับกลับมาอีกครั้ง คุณสามารถใช้วิธีการต่อไปนี้เพื่อกำจัดเซลล์เหล่านั้นออก

1. ใช้ยาปฏิชีวนะ

ยาปฏิชีวนะมีประสิทธิภาพมากกว่าในการฆ่าเชื้อแบคทีเรียในโรงงานเซลล์.ยาผสมมีประสิทธิภาพมากกว่าการใช้ยาเพียงอย่างเดียวยาป้องกันมีประสิทธิผลมากกว่ายาหลังการปนเปื้อนโดยทั่วไปยาป้องกันจะใช้ยาปฏิชีวนะชนิดคู่ (เพนิซิลลิน 100u/มล. บวกสเตรปโตมัยซิน 100ไมโครกรัม/มล.)หลังจากการปนเปื้อน วิธีการทำความสะอาดจะต้องมากกว่าปริมาณปกติ 5 ถึง 10 เท่าควรใช้ยานี้เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงหลังการเติมยา จากนั้นให้เปลี่ยนยาตามปกติของเหลววัฒนธรรมวิธีนี้อาจได้ผลในระยะแรกของการปนเปื้อนนอกจากเพนิซิลลินและสเตรปโตมัยซินแล้ว ยาปฏิชีวนะที่ใช้ยังรวมถึงเจนตามิซิน คานามัยซิน โพลีไมซิน เตตราไซคลิน ไนสตาติน เป็นต้น โดยทั่วไปที่ใช้คือคานามัยซิน 400 ถึง 800 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร หรือเตตราไซคลิน 200 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรสื่อจะเปลี่ยนทุก 2 ถึง 3 วันและส่งต่อเป็นเวลา 1 ถึง 2 รุ่นเพื่อรับการรักษาในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา มีรายงานว่า 4-ฟลูออโร, 2-ไฮดรอกซีควิโนลีน (Ciprofloxacin, Cip), อนุพันธ์ของ Pleu-romutilin (อนุพันธ์ของ Pleu-romutilin, BM-Cyclin2: BM-1 และอนุพันธ์ของ tetracycline (BM-2)) ยาปฏิชีวนะเป็น มีประสิทธิภาพในการฆ่าเชื้อมัยโคพลาสมาเมื่อใช้เดี่ยวๆหรือรวมกันยาปฏิชีวนะทั้งสามชนิดนี้ถูกเตรียมเป็นสารละลายเข้มข้น 250X ใน PBS และเก็บไว้ที่ -20°C เพื่อใช้ในภายหลังความเข้มข้นในการใช้งาน Cip คือ 10 μg/mL, BM-1 คือ 10 μg/mL และ BM-2 คือ 5μg/mLเมื่อใช้ ขั้นแรกให้ดูดอาหารเลี้ยงเชื้อที่ปนเปื้อน เพิ่มอาหารเลี้ยงเชื้อ RPMI1640 ที่มี BM-1 จากนั้นดูดอาหารเลี้ยงเชื้อหลังจากผ่านไป 3 วัน เพิ่มอาหารเลี้ยงเชื้อ RPMI1640 ที่ประกอบด้วย BM-2 และเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 4 วัน และอื่นๆ เป็นเวลา 3 วันติดต่อกัน .รอบจนพิสูจน์ได้ด้วยกล้องจุลทรรศน์การย้อมสีฟลูออเรสเซนต์ 33258 ว่ากำจัดไมโคพลาสมาออกแล้วจึงเติมอาหารเลี้ยงเชื้อแบบปกติเพื่อการเพาะเลี้ยงและผ่าน 3-4 ครั้ง

2. การบำบัดด้วยความร้อน

การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อที่ปนเปื้อนที่อุณหภูมิ 41°C เป็นเวลา 18 ชั่วโมงสามารถฆ่าเชื้อมัยโคพลาสมาได้ แต่มีผลเสียต่อเซลล์ดังนั้นจึงควรทำการทดสอบเบื้องต้นก่อนการรักษาเพื่อสำรวจเวลาการให้ความร้อนที่สามารถฆ่าเชื้อมัยโคพลาสมาได้ในระดับสูงสุดและมีผลกระทบต่อเซลล์น้อยที่สุดวิธีการนี้บางครั้งก็ไม่น่าเชื่อถือหากรักษาด้วยยาก่อนแล้วจึงอุ่นที่อุณหภูมิ 41°C ผลจะดีกว่า

3. ใช้เซรั่มเฉพาะไมโคพลาสมา

การปนเปื้อนของเชื้อไมโคพลาสมาสามารถกำจัดออกได้ด้วยเซรั่มภูมิคุ้มกันมัยโคพลาสม่าของกระต่าย 5% (ระดับไตเตอร์ของเม็ดเลือดแดง 1:320 ขึ้นไป)เนื่องจากแอนติบอดีจำเพาะสามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของไมโคพลาสมาได้ จึงทำให้กลายเป็นลบใน 11 วันหลังการรักษาด้วยแอนติซีรัม และยังคงเป็นลบใน 5 เดือนต่อมาเป็นลบอย่างไรก็ตามวิธีนี้จะยุ่งยากกว่า ไม่สะดวก และประหยัดเท่าการใช้ยาปฏิชีวนะ

4. วิธีการอื่นๆ

นอกจากวิธีการขจัดสิ่งปนเปื้อนที่กล่าวข้างต้นแล้ว ยังมีวิธีการปลูกเชื้อและฆ่าเชื้อในสัตว์ วิธี Macrophage phagocytosis วิธีเติมโบรโมราซิลในการปนเปื้อนขวดวัฒนธรรมแล้วฉายรังสีด้วยแสงและวิธีการกรอง ฯลฯ แต่ทั้งหมดนี้ยุ่งยากและไม่มีประสิทธิภาพมากกว่าดังนั้น เมื่อการปนเปื้อนของมัยโคพลาสมาเกิดขึ้น เว้นแต่จะมีคุณค่าที่สำคัญเป็นพิเศษ โดยทั่วไปแล้วจะทิ้งและเพาะเลี้ยงใหม่

โปรดติดต่อ Whatsapp และ Wechat : +86 180 8048 1709